Плодоводство
и виноградарство Юга России

Реферат

Оидиум (мучнистая роса) – заболевание виноградной лозы, возбудителем которого является аскомицет Erysiphe necator. Патоген наносит значительный ущерб промышленному виноградарству по всему миру. Выращивание устойчивых сортов винограда – оптимальный способ сокращения пестицидного контроля заболевания и получения экологически чистого урожая. Генотипы, обладающие устойчивостью к оидиуму, в основном, относятся к северо-американской и азиатской группе видов винограда. В настоящее время актуальной задачей селекции и генетики винограда является поиск доноров резистентности и вовлечение их в процесс создания новых высокоустойчивых и качественных сортов. На сегодняшний день определено более 10 крупных и менее значимых локусов устойчивости к оидиуму в геноме виногра-да. Локус Ren3 был идентифицирован на 15 хромосоме в генотипах сортов винограда Регент и Виллар Блан. Были найдены и ДНК-маркеры, пригодные для детекции гена. Нами проведена апробация двух тесно сцепленных ДНК-маркеров (UDV116, GF15-28) на 11 генотипах винограда разного происхождения. В работу включили ДНК сортов Регент и Виллар Блан, в которых и был идентифицирован ген Ren3 (положительные контроли), сортов Каберне-Совиньон и Шардоне (отрицательные контроли), а также 7 генотипов винограда – потенциальных носителей гена. Работа проведена методом ПЦР с разделением продуктов реакции методом капиллярного электрофореза с использованием автоматического генетического анализатора ABI Prism 3130. Целевые ПЦР-продукты, соответствующие литературным данным, определены в генотипах винограда Регент и Виллар Блан, а также в генотипах сортов Донус, Дунавски гымза и Сторгозия.

Реферат

Оомицет Plasmopara viticola вызывает одно из наиболее вредоносных заболеваний винограда – милдью. В районах влажного климата Черноморского побережья Северного Кавказа патоген причиняет особый ущерб. В виде эпифитотии UDC Plasmopara viticola развивается 6-7 раз за 10 лет и может вызывать потери от 50 до 100 % урожая текущего года, несмотря на наличие большого числа фунгицидов, способных сдерживать вредоносность этого заболевания. Цель работы – апробация микросателлитных ДНК маркеров GOB, CES, ISA и BER для изучения разнообразия популяций P. viticola, паразитирующих на виноградниках Краснодарского края. Материалом для исследования служили виноградные листья различных сортов, поражённые милдью. Листья отобраны в мае-июле 2019 г. в различных точках Краснодарского края. ДНК P. viticola выделяли из поражённой ткани виноградных листьев набором «ЦитоСорб», разработанным компанией «Синтол» специально для диагностики фитопатогенов. Всего экстрагировано 8 образцов ДНК P. viticola. Исследование выполнено методом полимеразной цепной реакции с оптимизацией количества и длительности циклов, а также концентрации реагентов. Размер амплифицированных фрагментов локусов GOB, CES, ISA и BER оценивали с помощью автоматического генетического анализатора ABI Prism 3130 методом фрагментного анализа. Обработку данных осуществляли в программе Gene Mapper 4.1. Наибольший полиморфизм выявлен по маркеру GOB (15 типов аллелей в восьми исследуемых образцах). Маркеры GOB, CES, ISA и BER могут быть использованы для изучения популяций P. viticola, распространённых на виноградниках Краснодарского края.

Реферат

Изучение и сохранение генетического разнообразия представляет собой одну из наиболее важных научных проблем в генетике культурных растений. Аборигенные, стародавние сорта различных регионов возделывания винограда – ценная часть мирового генофонда этой культуры. При изучении генофонда винограда в настоящее время традиционные ампелографические описания дополняются молекулярно-генетическими данными. В наших исследованиях проведено генотипирование 14 автохтонных сортов винограда Дагестана: Асыл Кара, Баят капы, Гимра, Гуляби дагестанский, Джунга, Дубут, Мола гусейн цибил, Риш баба, Сарах, Тавлинский поздний, Хатал баар, Хоп халат, Хоца цибил, Шавраны. Получены ДНК-фигерпринты по микросателлитным локусам VVMD5, VVMD7, VVMD27, VVS2, VrZAG62 и VrZAG79. Указанные SSR-маркеры рекомендованы союзом генетиков винограда в качестве основных для генотипирования Vitis vinifera. Молекулярно-генетический анализ выполнен на автоматическом генетическом анализаторе, позволяющем получать данные, соответствующие современным мировым требованиям идентификации генотипов винограда. В работе было апробировано использование мультиплексной (полимеразной цепной реакции (ПЦР). Мультиплексные наборы позволяют оптимизировать время, затрачиваемое на ДНК-анализ и значительно снизить стоимость его проведения. Наибольший полиморфизм при изучении данной группы дагестанских сортов выявлен по локусу VVMD27: идентифицировано 9 аллелей на локус; наименьший полиморфизм отмечен по локусу VrZAG62: 5 аллелей/локус. Определены сорта винограда с редкими аллелями по изученным локусам в исследуемой выборке данной группы сортов. Показана информативность набора микросателлитных маркеров VVMD5, VVMD7, VVMD27, VVS2, VrZAG62 и VrZAG79 для фингерпринтинга проанализированной выборки сортов винограда.

Реферат

Милдью – заболевание виноградной лозы, вызываемое облигатным гетероталличным биотрофным эндопаразитом Plasmopara viticola. Ареалом распространения данного патогена являются виноградники всего мира, но наибольшие потери несут зоны виноградарства с умеренноконтинентальным и субтропическим климатом. В Краснодарском крае эпифитотийное развитее милдью бывает 6-7 раз за 10 лет. Первые молекулярногенетические исследования патогена были начаты ещё в конце ХХ века. Цель данной работы – оценить на основе ДНК-маркерного анализа полиморфизм популяции P. viticola в двух генерациях патогена на виноградных растениях, произрастающих в изолированной географической точке. Материалом для исследования послужили пораженные листья винограда, собранные на вегетационной площадке ФГБНУ СКФНЦСВВ с растений, не подвергавшихся химическим обработкам. Сбор материала осуществляли в двух временных интервалах – конец июля (первая генерация патогена – 4 образца) и середина августа (вторая генерация – 6 образцов). Для изучения разнообразия использовали высокополиморфные SSR-маркеры – GOB и PV144. ДНК P. viticola выделяли непосредственно из инфицированных листьев ЦТАБ-методом. Всего было проанализировано 10 образцов ДНК патогена. Исследование выполнено классическим методом полимеразной цепной реакции. Размер целевых фрагментов локусов PV144 и GOB оценивали при помощи автоматического генетического анализатора ABI Prism 3130 методом фрагментного анализа. Полученные данные анализировали в программе Gene Mapper 4.1. Наибольшая степень полиморфизма была обнаружена по маркеру GOB – 7 типов аллелей, в меньшей степени PV144 – 4 типа аллелей. Было установлено, что образцы популяция патогена, собранные в период первой генерации, обладают значительно большим генетическим полиморфизмом в отличие от образцов, собранных в период второй генерации. Исследования в данном направлении продолжаются.

Реферат

Одним из лимитирующих факторов стабильно высоких урожаев с хорошим качеством являются различные болезни культуры. Например, заболевания, вызванные фитоплазмами, могут оказывать серьезное негативное влияние на количество получаемого урожая и его качество, что в дальнейшем может сказаться на качестве винной продукции и получаемой прибыли. Фитоплазмы являются одними из наиболее опасных фитопатогенов. На винограде они представлены двумя видами – Candidatus Phytoplasma vitis Flavescence dorée (вызывает золотистое пожелтение винограда) и Candidatus Phytoplasma solani Bois noir (почернение коры). Многие болезни растений, которые, как считается, вызываются фитоплазмами, были описаны до того, как с помощью молекулярногенетических исследований были определены различные группы фитоплазм, вызывающие эти болезни. Теперь можно оценить взаимосвязь между классификацией фитоплазм и конкретными болезнями растений. Золотистое пожелтение листьев является карантинным для РФ и Евросоюза заболеванием и наносит большой урон виноградникам, поэтому быстрая и точная идентификация этого заболевания очень важна. Основным методом идентификации фитоплазм является ПЦР в реальном времени (RT-PCR) со специфическими праймерными системами. Целью нашего исследования было сравнить методы выделения ДНК из растительной ткани, пораженной фитоплазмой, для дальнейшей постановки ПЦР в реальном времени. Данное исследование показало, что образцы, выделенные с помощью коммерческих наборов «АгроДиагностика» и «ЦитоСорб», показывают схожие результаты, в то время как образец, выделенный лабораторным методом на основе использования ЦТАБбуфера, показал более высокие и ранние пики на графике, что имеет значение при детекции малого количества патогена в исследуемом материале и доказывает большую эффективность данного способа выделения.