Плодоводство
и виноградарство Юга России
Токмаков Сергей Вячеславович
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Северо-Кавказский федеральный научный центр садоводства, виноградарства, виноделия»
лаборатория генетики и микробиологии
науч. сотрудник лаборатории
Статьи в журнале (всего: 24)
Выделены новые генотипы яблони, сочетающие высокое качество плодов с устойчивостью к абио- и биотическим стрессорам среды на основе отбора по фенотипу в комплексе с идентификацией целевых признаков методом молекулярного ДНК-маркирования и биохимическими методами исследования.
Основные сорта винограда, используемые как столовые сорта и для виноделия, принадлежат к виду Vitis vinifera L., который имеет высокое качество ягод, но довольно низкую устойчивость к болезням и морозу. Одним из доноров ценных признаков для селекции сортов винограда является вид Vitis amurensis Rupr. Например, некоторые генотипы V.amurensis несут гены устойчивости к милдью Rpv10 и Rpv12. Цель работы – изучить генетический потенциал устойчивости к милдью методом ДНК-маркерного анализа некоторых гибридных форм, полученных с использованием амурского винограда. Исследовались ДНК двадцати одного генотипа винограда, созданных Ф.И. Шатиловым с использованием V. аmurensis, и сохраняемых в коллекции А.Ю. Немытова (Оренбургская область). Экстракцию ДНК осуществляли методом ЦТАБ из гербаризированных молодых побегов растений винограда. В работе по идентификации гена Rpv10 использовали тесно сцепленный ДНК-маркер GF09-46, для выявления гена Rpv12 – маркеры UDV360, UDV343, фланкирующие локус устойчивости. Разделение продуктов реакции и анализ размера ПЦР-фрагментов проводили с использованием автоматического генетического анализатора. В качестве контрольных генотипов в исследования были включены сорта винограда, которые являются носителями генов: Кунлеань (Rpv12) и Саперави северный (Rpv10). В двух формах под условными названиями «Мускат сверхранний № 1» и «Гибридная форма № 3» выявлено наличие генов Rpv12 и Rpv10, соответственно. Данные генотипы обладают рядом положительных характеристик, перспективных в селекции столовых сортов винограда, и могут быть рассмотрены в качестве источников ценных признаков.
При изучении генофонда винограда в настоящее время традиционные ампелографические описания дополняются молекулярно-генетическими данными. Территория Абхазии – один из очагов возникновения культурного винограда, здесь обнаружено множество дикорастущих форм и древних аборигенных сортов. Аборигенные, стародавние сорта различных регионов возделывания винограда – ценная часть мирового генофонда Vitis vinifera. Нами выполнено генотипирование растений винограда сорта Качич, который можно отнести к наиболее известным местным сортам Абхазии. В работе использовали SSR-маркеры, рекомендованные союзом генетиков винограда для генотипирования Vitis vinifera: VVS2, VVMD5, VVMD7, VVMD25, VVMD27, VVMD28, VVMD32, VrZAG62, VrZAG79. Молекулярно- генетический анализ выполнен методом ПЦР с использованием автоматического генетического анализатора ABI Prism 3130. Объекты исследования – растения винограда, возделываемые в трех точках Абхазии, под названием «Качич», и близкие по морфологическим признакам описанию сорта, приведённому в Ампелографии СССР. ДНК-анализ выявил, что одна из анализируемых выборок значительно отличается от двух других по микросателлитным профилям. Таким образом, можно утверждать, что в целом под одним наименованием в Абхазии выращивают как минимум два разных генотипа с похожими морфологическими признаками, при этом две другие выборки сорта показали идентичные ДНК-профили растений. По ампелографическим признакам эти образцы наиболее близки к описанию морфотипа «Качич», представленному в ампелографии. Одна из данных выборок сорта произрастает в коллекции ООО «Вина и Воды Абхазии» и заложена посадочным материалом, заготовленным на ампелографической коллекции НИИ Виноградарства и Виноделия «Магарач». Можно заключить, что нами получен ДНК-профиль генотипа Качич, соответствующий морфологическому описанию сорта.
Целью представленной работы была ДНК-паспортизация ряда востребованных сортов винограда селекции СКЗНИИСиВ и АЗОСВиВ на основе анализа полиморфизма микросателлитных локусов. Результаты проведенного исследования могут быть использованы для идентификации сортов, проверки чистосортности маточных насаждений и посадочного материала отечественных сортов винограда. Нами проведено изучение сортов отечественной селекции, перспективных для совершенствования промышленного сортимента винограда юга России на молекулярно-генетическом уровне. В статье представлены результаты ДНК-паспортизации шести отечественных сортов винограда: Бархатный, Владимир, Дмитрий, Достойный, Курчанский, Красностоп АЗОС. Анализ генотипов сортов проводили на смеси образцов ДНК из 7-10 типичных растений по каждому сорту. ДНК-профилирование проведено по микросателлитным локусам VVMD5, VVMD7, VVMD27, VVS2, VrZAG62 и VrZAG79, именно эти маркеры рекомендованы в качестве основных для генотипирования Vitis vinifera L. Микросателлиты (SSR-simplesequencerepeats) – тандемные повторы простых последовательностей в структуре ДНК чаще всего используют в качестве ДНК-маркеров для изучения генотипов винограда. Основной метод, применяемый в работе, – полимеразная цепная реакция с разделением продуктов реакции с использованием автоматического генетического анализатора ABI Prism 3130. В качестве контроля в работе использовали ДНК сортов Шардоне и Каберне-Совиньон, аллельный состав которых по изучаемым SSR-локусам известен. Генотипы сортов показали различные комбинации аллелей по изученным локусам. Таким образом, рекомендуемого минимального набора микросателлитных маркеров достаточно для дифференциации изученных генотипов. В статье также приведено краткое описание исследованных сортов, их основные отличительные положительные агробиологические характеристики.
Милдью – одно из наиболее распространенных заболеваний виноград-ной лозы. Эффективным способом контроля распространения заболеваний является возделывание устойчивых сортов. Сорта европейского винограда V. vinifera практически не обладают устойчивостью к милдью. Генотипы, несущие гены устойчивости, относятся к сортам винограда Северной Америки и Азии. Так селекция устойчивых сортов винограда строится на основе межвидовой гибридизации. Современные методы генетики и молекулярной биологии расширяют возможности проводимых исследований в данном направлении. На сегодняшний день идентифицировано порядка 20 круп-ных и мелких локусов устойчивости к P. viticola. К крупным локусам устойчивости относят Rpv10 и Rpv3. Ген Rpv10, наследуемый от V. amurensis, был впервые определен F. Schwander и др. Был идентифицирован и ДНК-маркер GF09-46, тесно сцепленный с данным локусом. Ген Rpv3 впервые был найдет в сорте Бьянка – сложном межвидовом гибриде винограда. Позже бы-ло определено, что ген Rpv3 имеет семь гаплотипов, идентификация которых возможна микросателлитными маркерами UDV305, UDV737. Нами проведено исследование методом ПЦР генотипов отборных и элитных форм и новых межвидовых сортов винограда селекции СКФНЦСВВ с помощью ДНК-маркеров, сцепленных с генами устойчивости к милдью Rpv10 и Rpv3. Разделение продуктов реакции выполнено методом капиллярного электрофореза с использованием автоматического генетического анализатора ABI Prism 3130. Анализы проведены в соответствии с потенциальной возможностью идентификации целевых аллелей согласно родословной изучаемых образцов. В шести гибридных генотипах определен ген Rpv3, ген Rpv10 – определен в одном гибриде винограда.