Плодоводство
и виноградарство Юга России

Реферат

Богатство генетического инструментария даёт возможность осуществлять анализ филогении и генетического полиморфизма у исследуемых таксонов. К важным генетическим компонентам, встречающимся в большинстве геномов эукариот, можно отнести ретротранспозоны. Исходя из особенностей этих мобильных элементов генома исследование ретротранспозонов актуально для создания генетических маркеров. На данный момент распространение в генетических работах получили ДНК-маркеры, чей полиморфизм обусловлен ретротранспозонными вставками. Целью данной работы является поиск и обнаружение эффективных IRAP и ISSR маркеров для генотипирпования подвоев яблони. Исходя из качества полученного ДНК-фингерпринта, по каждому из задействованных в работе маркеров был осуществлен отбор наиболее информативных маркеров. Праймеры отобранных IRAP и ISSR маркеров будут использованы в дальнейшем для генотипирования подвоев. В результате выполненной работы на генотипах подвоев яблони из 5 IRAP маркеров 4 дали ДНК-фрагменты при постановке ПЦР. При этом 2 маркеров из общей выборки были определены как перспективные для дальнейшей работы. В группу перспективных маркеров вошли IRAP, обладающие наибольшим количеством амплифицированных фрагментов и легко интерпретируемым видом ДНК-фингерпринтов. К данной группе отнесены: Cass 1 и Сass 2. В случае апробации 8 ISSR для дальнейшей работы были отобраны 3 маркера. Дальнейшая работа будет направлена на проведение оценки генетического полиморфизма отобранных маркеров с последующим расширением объема анализируемой выборки образцов.

Реферат

Одним из лимитирующих факторов стабильно высоких урожаев с хорошим качеством являются различные болезни культуры. Например, заболевания, вызванные фитоплазмами, могут оказывать серьезное негативное влияние на количество получаемого урожая и его качество, что в дальнейшем может сказаться на качестве винной продукции и получаемой прибыли. Фитоплазмы являются одними из наиболее опасных фитопатогенов. На винограде они представлены двумя видами – Candidatus Phytoplasma vitis Flavescence dorée (вызывает золотистое пожелтение винограда) и Candidatus Phytoplasma solani Bois noir (почернение коры). Многие болезни растений, которые, как считается, вызываются фитоплазмами, были описаны до того, как с помощью молекулярногенетических исследований были определены различные группы фитоплазм, вызывающие эти болезни. Теперь можно оценить взаимосвязь между классификацией фитоплазм и конкретными болезнями растений. Золотистое пожелтение листьев является карантинным для РФ и Евросоюза заболеванием и наносит большой урон виноградникам, поэтому быстрая и точная идентификация этого заболевания очень важна. Основным методом идентификации фитоплазм является ПЦР в реальном времени (RT-PCR) со специфическими праймерными системами. Целью нашего исследования было сравнить методы выделения ДНК из растительной ткани, пораженной фитоплазмой, для дальнейшей постановки ПЦР в реальном времени. Данное исследование показало, что образцы, выделенные с помощью коммерческих наборов «АгроДиагностика» и «ЦитоСорб», показывают схожие результаты, в то время как образец, выделенный лабораторным методом на основе использования ЦТАБбуфера, показал более высокие и ранние пики на графике, что имеет значение при детекции малого количества патогена в исследуемом материале и доказывает большую эффективность данного способа выделения.

Реферат

Вирус плодовых культур оказывает негативное влияние на сроки созревания и качество плодоношения растений. Для закладки садов необходимо использовать растения, свободные от вирусов. Вирус шарки сливы является серьёзной угрозой для садоводства, так как имеет широкий спектр растений – носителей и способен в короткие сроки распространяться в садовых насаждениях. Методы эффективной диагностики данного вируса имеют высокое значение для производства безвирусного посадочного материала. В данной работе представлены результаты апробации и оптимизации методики диагностики вируса шарки сливы с применением метода ПЦР с обратной транскрипцией, а также оценка его эффективности в сравнении с коммерческим набором. В качестве материала выступали различные ткани подвоев ПКСК 1, АИ 1, ВСЛ 1 и Гизела 5, полученных в культуре апикальных меристем и растения сливы сорта Стенлей. Была оптимизирована концентрация в соотношении добавленных нами Oligo dT (Oligo(dT)15-primer) и Random (Random (dN)10–primer) праймеров (1:2), с целью увеличения выхода специфических фрагментов вирусной кДНК. Праймерная пара контроля амплификации подобрана к участку гена, кодирующего малую субъединицу рибулоза 1,5 – бисфосфат карбоксилазы/ оксигеназы. Для сравнительной оценки использовали пробы кДНК растений, полученных в культуре апикальных меристем in vitro и пробы симптомированных растений. После получения препарата тотальной РНК проводили обратную транскрипцию и амплификацию полученной кДНК с последующим анализом продуктов на агарозном геле. В образцах не наблюдались продукты неспецифической амплификации и одноцепочечной ДНК. Продукты амплификации положительного контроля наблюдались во всех исследованных образцах. Исследованый нами метод показал высокую эффективность в сравнении с контрольным.

Реферат

Контроль сортовой чистоты посадочного материала является существенным фактором, влияющим на производительность садоводческих хозяйств. К современным методам контроля сортовой чистоты саженцев плодовых культур, обладающим перспективой внедрения в широкую практику, можно отнести SCoT-маркеры (Start Codon Targeted). В связи с чем, исходя из перспективности использования SCoT-маркеров в работах по идентификации растительного материала, была проведена работа по отбору эффективных комбинаций SCoT-маркеров. Для повышения числа возможных вариантов маркирования был использован подход, основанный на создании маркеров из двух SCoT-праймеров. Целью данной работы был отбор комбинаций SCoT-маркеров, перспективных для ДНК-фингерпринтинга яблони, что в дальнейшем позволит использовать лучшие комбинации в идентификации посадочного материала. В работе представле-ны результаты оценки сочетаний SCoT-маркеров, для идентификации представителей рода Malus. 18 SCoT-маркеров на основе предварительной оценки были сгруппированы в 68 комбина-ций. Отбор эффективных комбинаций марке-ров осуществлялся по ряду необходимых критериев, таких как высокое качество ДНК-фингерпринтов и значительное количество полиморфных амплифицирован-ных ДНК-фрагментов. Особенно значимы данные характеристики при генетической оценке близкородственных генотипов. Требования к качеству ДНК-фингерпринтов значительно повышаются, что обусловлено большим количеством идентичных ДНК-фрагментов. Около 45 % комбинаций были удачными и отобраны для дальнейших работ как перспективные. Апробация, проведённая в работе, дала возможность определить перспективные маркеры среди 68 задействованных в исследовании. Комбинации SCoT-праймеров, отобранных в данной работе, могут быть использованы в различных направлениях, включая генетическую идентификацию образцов, анализ генетической однородности растений, получаемых в процессе микроклонального размножения, а также для выполнения исследования по изучению генетических взаимосвязей образцов.

Реферат

Развитие резистентности Venturia inaequalis к фунгицидам со специфическим механизмом действия ставит под угрозу эффективный контроль садов против парши яблони. Была изучена чувствительность популяции возбудителя парши яблони к ципродинилу в экспериментах «доза-эффект» для трёх популяций патогена из садов Краснодарского края. Одна из популяций была собрана в заброшенном саду и являлась исходной. Остальные популяции собраны в коммерческих садах с ежегодным использованием фунгицидов, в том числе и ципродинила. Определяли влияние 7 концентраций ципродинила: 0,001, 0,01; 0,10; 0,50; 1,00; 10,00 и 50,00 мг/л на рост моноспоровых изолятов патогена на синтетической среде Леру (Leroux). Всего проанализировано 63 изолята гриба. Рост мицелия на фунгициде выражали относительно контрольного варианта среды в процентах. Концентрацию действующего вещества фунгицида, которая приводила к двухкратному торможению роста, называемую эффективной 50 % концентрацией (ЭК50), находили с использованием пробит регрессионного преобразования величины относительного роста мицелия на действующем веществе. Анализ кривых «доза-эффект», показал горметические реакции при низких концентрациях фунгицида. По результатам исследования выявили, что чувствительность исходной популяции была значительно выше, чем в двух фунгицидных популяциях на уровне значимости p