Плодоводство
и виноградарство Юга России

Реферат

На территории Краснодарского края виноград возделывается с древности. Однако изучение генофонда местного дикорастущего винограда остается открытым вопросом. Данная работа посвящена изучению дикорастущих лоз винограда, обнаруженных в районе Тонкого мыса города Геленджика. Эколого-географические и природно-климатические условия данной территории можно рассматривать как благоприятное место для произрастания дикого винограда. Было обнаружено 7 форм дикорастущего винограда, имеющих некоторые сходства и отличия о эколого-биологическим и морфологическим показателям. Большинство исследуемых форм двудомные растения – есть образцы как с мужским типом цветка, так и с женским. На одном экземпляре соцветия не были обнаружены. С найденных форм винограда был отобран материал для проведения ДНК-анализа. ДНК выделяли методом ЦТАБ из гербаризированных верхушек. Выполнено генотипирование дикорастущих форм по микросателлитным локусам VVS2, VVMD5, VVMD7, VVMD27, VrZag62, VrZag79, которые используются как стандартный набор для ДНК-паспортизации сортов винограда, а также по локусам UDV737 и CenGen6, которые сцеплены с генами устойчивости к милдью Rpv3 и оидиуму Ren9, соответственно. Целевые фрагменты, размер которых указывает на наличие генов устойчивости, по ДНК-маркерам UDV737 и CenGen6 не обнаружены. Полученные ДНК-профили по микросателлитным локусам показали генетические различия форм в анализируемой выборке. В среднем идентифицировано 5 типов аллелей на локус. Кластерный анализ данных ДНК-профилирования показал, что одна из найденных форм отличается от остальных наиболее значимо, остальные образцы по результатам анализа были распределены в два подкластера из двух и четырех генотипов.

Реферат

Милдью – заболевание виноградной лозы, вызываемое облигатным гетероталличным биотрофным эндопаразитом Plasmopara viticola. Ареалом распространения данного патогена являются виноградники всего мира, но наибольшие потери несут зоны виноградарства с умеренноконтинентальным и субтропическим климатом. В Краснодарском крае эпифитотийное развитее милдью бывает 6-7 раз за 10 лет. Первые молекулярногенетические исследования патогена были начаты ещё в конце ХХ века. Цель данной работы – оценить на основе ДНК-маркерного анализа полиморфизм популяции P. viticola в двух генерациях патогена на виноградных растениях, произрастающих в изолированной географической точке. Материалом для исследования послужили пораженные листья винограда, собранные на вегетационной площадке ФГБНУ СКФНЦСВВ с растений, не подвергавшихся химическим обработкам. Сбор материала осуществляли в двух временных интервалах – конец июля (первая генерация патогена – 4 образца) и середина августа (вторая генерация – 6 образцов). Для изучения разнообразия использовали высокополиморфные SSR-маркеры – GOB и PV144. ДНК P. viticola выделяли непосредственно из инфицированных листьев ЦТАБ-методом. Всего было проанализировано 10 образцов ДНК патогена. Исследование выполнено классическим методом полимеразной цепной реакции. Размер целевых фрагментов локусов PV144 и GOB оценивали при помощи автоматического генетического анализатора ABI Prism 3130 методом фрагментного анализа. Полученные данные анализировали в программе Gene Mapper 4.1. Наибольшая степень полиморфизма была обнаружена по маркеру GOB – 7 типов аллелей, в меньшей степени PV144 – 4 типа аллелей. Было установлено, что образцы популяция патогена, собранные в период первой генерации, обладают значительно большим генетическим полиморфизмом в отличие от образцов, собранных в период второй генерации. Исследования в данном направлении продолжаются.

Реферат

Исследование дикорастущих форм винограда позволяет расширить фундаментальные знания о разнообразии генофонда винограда, также дикие формы изучают с целью выявления потенциальных источников устойчивости к стресс-факторам условий произрастания. Ген устойчивости к оидиуму Ren1 – один из немногих генов устойчивости к патогенам, идентифицированных в Vitis vinifera. Также было обнаружено его присутствие в некоторых дикорастущих формах V. vinifera ssp. silvestris Gmel. Задачей данной работы было исследование дикорастущих форм винограда, найденных в Краснодарском крае, ДНК-маркерами гена устойчивости к оидиуму Ren1 с целью поиска потенциальных доноров резистентности. Исследование проводилось на 35 генотипах дикорастущего винограда, отобранных в нескольких географических точках Краснодарского края вдоль береговой линии Черного моря и реки Кубань. Полиморфизм локуса Ren1 изучали методом ПЦР с помощью косегрегирующих маркеров SC8-0071-014 и sc47-18 с последующей оценкой размера амплифицированных фрагметов методом капиллярного гель электрофореза на приборе Нанофор 05 и статистической обработкой в программе GenAlEx 6.5. В результате в изучаемой выборке генотипов выявлен достаточно высокий полиморфизм по исследуемым микросателлитным локусам (SC8-0071-014 – 18 типов аллелей, sc47-18 – 8 аллелей) – в среднем определено 13 аллелей на локус. В превалирующем большинстве генотипов определено гетерозиготное состояние по исследуемым локусам, что отражено показателями ожидаемой (He) и фактически выявленной (Ho) гетерозиготности: значения фактической превышают значения ожидаемой. Аллелей устойчивости гена Ren1 не обнаружено ни в одном из исследуемых образцов дикого винограда.

Реферат

Мучнистая роса винограда или оидиум – одно из наиболее распространенных и экономически значимых заболеваний винограда. Возбудителем заболевания является биотрофный аскомицет Erysiphe necator. Мучнистая роса является глобальным заболеванием, которое снижает урожайность и качество винограда, нанося при этом значительный ущерб виноградарству по всему миру. Большинство культивируемых сортов винограда восприимчивы к этому патогену, поэтому для снижения уровня заболеваемости, используют обработку пестицидами. Устойчивостью к оидиуму обладают, в основном, генотипы северо-американских и азиатских сортов винограда. Поиск доноров резистентности к оидиуму и последующее создание новых устойчивых и качественных сортов винограда, является одной из основных задач селекции винограда. Возделывание устойчивых сортов позволит сократить использование пестицидов, что в дальнейшем даст возможность перейти к более экологически безопасному промышленному виноградарству. В настоящее время идентифицирован ряд локусов устойчивости к оидиуму (более 10), также сконструированы ДНК-маркеры, пригодные для выявления аллельного состояния этих генов. Большой вклад среди идентифицированных локусов устойчивости к оидиуму имеют гены Ren3 и Ren9. В исследовании были задействованы элитные технические формы винограда селекции СКФНЦСВВ, генотипы которых потенциально могут содержать локусы устойчивости к оидиуму (Тана 19, Тана 72, Тана 73, Тана 74, Тана 82, Тана 92). Для идентификации генов, обуславливающих генетическую резистентность к оидиуму, были задействованы специфические кодоминантные SSR-маркеры GF15-42, ScORGF15-02, позволяющие идентифицировать ген Ren3, и SSR-маркер CenGen6 для идентификации гена Ren9. В качестве положительного контроля в работе использовали ДНК сорта Seyve Villard 12-375, который имеет аллели устойчивости. Работа проведена методом ПЦР, с разделением продуктов реакции при помощи метода капиллярного электрофореза на автоматическом генетическом анализаторе Нанофор 05. В результате ДНК-маркерного анализа определено, что генотип элитной формы Тана 92 содержит ген Ren9, гены Ren3 и Ren9 определены в формах Тана 73 и Тана 74.